ВІКІСТОРІНКА
Навигация:
Інформатика
Історія
Автоматизація
Адміністрування
Антропологія
Архітектура
Біологія
Будівництво
Бухгалтерія
Військова наука
Виробництво
Географія
Геологія
Господарство
Демографія
Екологія
Економіка
Електроніка
Енергетика
Журналістика
Кінематографія
Комп'ютеризація
Креслення
Кулінарія
Культура
Культура
Лінгвістика
Література
Лексикологія
Логіка
Маркетинг
Математика
Медицина
Менеджмент
Металургія
Метрологія
Мистецтво
Музика
Наукознавство
Освіта
Охорона Праці
Підприємництво
Педагогіка
Поліграфія
Право
Приладобудування
Програмування
Психологія
Радіозв'язок
Релігія
Риторика
Соціологія
Спорт
Стандартизація
Статистика
Технології
Торгівля
Транспорт
Фізіологія
Фізика
Філософія
Фінанси
Фармакологія


Взятие крови из вены уха кролика.

Загрузка...

Для получения крови из краевой вены нужно, прежде всего, вызвать гиперемию уха, потирая его ладонями рук и слегка ударяя кончиками паль­цев. Затем вдоль наружного края уха удаляют пушок и про­тирают ватой, увлажненной 70% спиртом. Если в результате всех перечисленных процедур сосуды не инъецируются, ухо смазывают ксилолом или толуолом. После того как сосуды набухнут и четко обозначатся на поверхности ушной ракови­ны, наружную поверхность ее покрывают тонким слоем жид­кого парафина (во избежание быстрого свертывания крови) и делают прокол вены.

Для получения небольшого количества крови (менее 1 мл) прокалывают одну из небольших периферических ветвей, а для получения больших объемов крови (5—10 мл) вскрывают краевую вену уха. С этой целью иглу шприца вводят в вену почти параллельно поверхности уха, чтобы не повредить про­тивоположную стенку вены. При проколе вены иглой шприца кровь, как правило, выходит отдельными каплями с боль­шими интервалами, и кровотечение прекращается быстро. Для того, чтобы вызвать обильное кровотечение, нужно сде­лать ранку с рваными краями. С этой целью пользуются об­ломком тонкого капилляра пастеровской пипетки. При таком способе прокола из уха кролика получают до 30 мл крови. После взятия крови к проколу вены прикладывают на 2—3 минуты кусочек сухой стерильной ваты, не нажимая сильно на стенку сосуда, так как при этом кровотечение может усилиться. Если кровотечение долго не прекращается, хорошие ре­зультаты дает нанесение на ранку нескольких капель пе­рекиси водорода.

Взятие крови из вен у морских свинок, крыс и мышей. У морских свинок кровь в количестве 0,3—0,5 мл получают после нанесения насечек на край уха или прокола мягких по­душек лапы.

У белых крыс и мышей для получения 1—3 капель кро­ви приходится прибегать к ампутации кончика хвоста пос­ле продолжительного прогревания его в воде температуры 45—50°С или протирания ксилолом. Взяв кровь, рану прижигают перекисью водорода.

Есть способ, позволяющий получить у крыс 0,5—1 мл крови из венозного сплетения, ле­жащего в орбите, позади глазного яблока. Взятие крови про­изводят стеклянной пипеткой с оттянутым капилляром (на­ружный диаметр 0,6 мл), острие которого сточено под уг­лом 45°.

Животное берут I и II пальцами левой руки со стороны спины за шею и слегка сдавливают с боков, вызывая легкое выпячивание глаз. Вращательным движением пипетки дела­ют прокол конъюнктивального мешка в медиальном углу гла­за между глазным яблоком и орбитой. После прокола пипет­ку ведут в направлении гортани на глубину 4—5 мм. Попа­дание в венозное сплетение сопровождается заполнением ка­пилляра пипетки кровью.

Получение дефибринированной крови. Кровь животного сливают в стерильную колбу со стеклянными бу­сами и непрерывно в течение 10—15 мин встряхивают. В ре­зультате встряхивания находящийся в крови фибрин выпада­ет в осадок, обволакивая бусы, а дефибринированная кровь, слитая в другую колбу или пробирку, утрачивает способ­ность свертываться.

Приготовление взвеси эритроцитов. Для ос­вобождения от пленок фибрина дефибринированную кровь фильтруют через трехслойный марлевый фильтр. Фильтрат наливают в центрифужные пробирки и центрифугируют при 2000—3000 об./мин. в течение 10—15 минут. Эритроциты оседают на дно пробирки, а прозрачная, слегка желтоватого цвета плазма образует надосадочный слой. После центрифугирова­ния уровень жидкости в пробирке отмечают карандашом, от­сасывают плазму пастеровской пипеткой, эритроциты промы­вают, доливая до метки стерильный изотонический раствор хлорида натрия, и вновь центрифугируют. Промывание эрит­роцитов с добавлением свежего раствора производят 2—3 разa, чтобы последняя порция промывной жидкости была бес­цветна.

Из промытых эритроцитов готовят 3% или 5% взвесь, прибавляя к 3—5 мл эритроцитов соответственно 97—95 мл изо­тонического раствора хлорида натрия (для получения мень­ших количеств взвеси объемы обоих ингредиентов уменьша­ют в одинаковое число раз).

Взвесь эритроцитов можно хранить в холодильнике при температуре 3—4°С в течение 5—6 дней.

Приготовление сыворотки крови. Кровь, со­бранную в стерильную пробирку, закрывают ватно-марлевой пробкой, ставят на 20—30 мин в термостат или водяную ба­ню, отрегулированную на 37°С, так как в тепле кровь свер­тывается быстрее и лучше. Во время свертывания сгусток крови обычно прилипает к стенкам пробирки. Поэтому после взятия пробирок из термостата сгусток отделяют от стенок пробирки круговым движением капилляра стерильной пасте­ровской пипетки или стеклянной стерильной палочкой.

После отделения сгустка сыворотку ставят в холодильник при температуре 3—4°С. В течение 3—4 ч сыворотка обычно отделяется полностью, и ее можно отсосать стерильной пасте­ровской пипеткой. Для того чтобы во время отсасывания со­держимое пробирки было хорошо видно, пастеровскую пи­петку соединяют со стеклянной трубкой — «мундштуком» (ре­зиновая трубка длиной 20—25 см). При отсасывании кончик пипетки не должен соприкасаться со сгустком крови, чтобы в сыворотку не попали эритроциты.

Окрашенную в розовый цвет сыворотку центрифугируют при 2000—3000 об./мин. в течение 10—15 мин для осаждения форменных элементов крови.

При взятии крови вскоре после кормления животных, а также при повторных кровопусканиях с короткими интерва­лами возникает иногда липемия, т. е. появление избытка жи­ровых веществ в крови. Сыворотки, получаемые во время липемии, бывают мутные (хилезные), иногда опалесцирующие, и это очень затрудняет чтение диагностических реакций, осо­бенно реакции преципитации. Во избежание получения мут­ных сывороток кровь у животных берут натощак. Просветле­ние липемической плазмы наступает также при введении в кровеносное русло животного гепарина, способствующего по­вышению концентрации в крови фермента, называемого фак­тором просветления. С этой целью кроликам весом 2—2,5 кг в краевую вену уха вводят за 1—1,5 ч до обескровливания 60 мг гепарина.

Форменные элементы из крови удаляют центрифугирова­нием. В слитой с осадка плазме через короткое время после центрифугирования образуется сгусток фибрина, который уп­лотняется при перемешивании крови стеклянной палочкой. Затем этот сгусток удаляют. В некоторых случаях фибрин из плазмы выпадает не полностью. Для удаления остатков фиб­рина и выявления полноты его удаления к сыворотке при­бавляют несколько капель тромбина. Освобожденную от фиб­рина сыворотку фильтруют через асбестовые фильтры. Полу­ченная таким способом сыворотка совершенно прозрачна и не имеет признаков опалесценции.

Приготовление цитратной крови. Полученную из сердца или вены кровь сливают в пробирку с 5% раство­ром цитрата натрия (10 мл крови, 1 мл цитрата натрия). Цитратная кровь не свертывается.

Приготовление плазмы крови. Цитратную кровь ставят на 18—20 ч в холодильник или подвергают центрифу­гированию. В результате над осадком эритроцитов образуется прозрачный слой жидкости желтоватого цвета—плазмы.

Умерщвление и вскрытие лабораторных животных

В лабораторной практике приняты способы умерщвления, которые характеризуются простотой приемов и вызывают быструю, безболезненную смерть животного. Мышей, крыс, морских свинок по­мещают в стеклянную, плотно закрывающуюся банку с ку­сочком ваты, пропитанным хлороформом или эфиром. Жи­вотные засыпают и гибнут в течение 3—5 минут. Кроликов умерщвляют посредством воздушной эмболии. Для этого в краевую вену уха по направлению к его основанию вводят иглу шприца. Появление капельки крови свидетельствует о том, что игла находится в вене. После этого иглу соединяют с пу­стым 10-граммовым шприцем, поршень которого вытянут до конца. При надавливании на поршень в кровеносную систему животного поступает находящийся в цилиндре шприца дух, вызывая эмболию и быструю смерть.

Вскрытие животных

Трупы лабораторных животных вскрывают с целью выяснения причин гибели, выделения вве­денного возбудителя, выявления механизма распространения микробов в организме и места их локализации, изучения патологоанатомических изменений, наступающих в результате перенесенной инфекции. Вскрытие трупов животных произво­дят стерильными инструментами, соблюдая правила асеп­тики.

На столе должны находиться стакан, наполненный до по­ловины спиртом, стерильные ножницы, скальпель, анатомиче­ские и хирургические пинцеты, бактериальная петля, стериль­ные чашки Петри, пробирки и чашки с питательными среда­ми, стерильные пастеровские пипетки, предметные стекла, сте­рильный изотонический раствор хлорида натрия, банка с дез­инфицирующим раствором, ватные тампоны, спички и горелки (спиртовая и газовая). Вскрытие трупов следует производить таким образом, чтобы предупредить внесение микро­организмов с поверхности в глубину тканей, а также перенос микробов из одного органа в другой. С этой целью рекомен­дуется вскрывать животных в агональном состоянии, усыпив их эфиром, или тотчас после наступления смерти, так как в ближайшие часы после нее проницаемость тканей нарушается, и бактерии из одного органа могут проникнуть в другой. Особую опасность в этом отношении представляет кишечник, со­держимое которого изобилует микробами.

Труп животного брюшком кверху кладут на деревянную доску или лоток с пластинкой застывшего парафина, растяги­вают пинцетом все 4 лапы и в таком положении фиксируют их булавками или небольшими острыми гвоздиками к по­верхности дерева или парафина. Грудь и брюшко протирают ватой, смоченной 5% раствором карболовой кислоты или 5% раствором хлорамина, или, лучше, смачивают спиртом и поджигают шерсть, чтобы содержащиеся на ней микробы, в том числе спороносные палочки, не разлетались и не загрязняли стерильные инструменты и органы вскрытия трупа. В процес­се вскрытия придерживаются общепринятого порядка. Сна­чала исследуют наружные покровы и подкожную клетчатку, затем проводят вскрытие, исследование и взятие материала из органов грудной полости, а в последнюю очередь вскрытие, исследование и взятие материала из органов брюшной по­лости.

Обработанную кожу разрезают по средней линии живо­та протяженностью от симфиза до грудино-ключичного со­членения. На уровне передних и задних лап делают боковые надрезы. Кожные лоскуты отпрепаровывают от подкожной клетчатки и отворачивают в стороны, прикалывая булавками к доске.

В протоколе вскрытия отмечают состояние подкожной клетчатки и лимфатических узлов в паху и подмышечных впадинах. Подкожная клетчатка может быть развита сильно, слабо или умеренно. Подмышечные и паховые узлы обнару­живаются легко. При осмотре узлов обращают внимание на их величину, форму и цвет. Для бактериологического иссле­дования лимфатические узлы раздавливают стерильным пин­цетом и погружают в жидкую питательную среду или втира­ют в поверхность плотной питательной среды.

Сменив или простерилизовав использованные для вскры­тия кожных покровов инструменты, приступают к вскрытию грудной клетки. Грудину, захваченную пинцетом, слегка при­поднимают, делают под ней небольшой надрез, вводят в него браншу ножниц и перерезают ребра вначале с одной, а за­тем с другой стороны. Если в грудной полости есть экссудат, из него делают мазки и посев. Вновь сменив ножницы или протерев их ватой, смоченной спиртом, разрезают перикард, обнажая поверхность сердца. Накаливают на пламени го­релки бранши пинцета или скальпель, прижигают поверх­ность сердца, затем стерильным пинцетом оттягивают кверху ушко правого предсердия и после этого через прижженное место вводят в полость желудочка или предсердия капилляр пастеровской пипетки. Кровь, поднявшуюся по капилляру пи­петки, засевают в питательную среду.

Далее приступают к осмотру органов, расположенных в грудной полости, регистрируя в протоколе имеющиеся в них изменения, например наличие экссудата в полости плевры, абсцессы, гиперемию (багрово-красное окрашивание) или, на­оборот, ишемию (малокровие) в легких. Кусочки легкого с выявленными в нем изменениями вырезают для бактериоло­гического исследования.

После этого, сменив инструменты, переходят к исследова­нию органов брюшной полости. Передний листок брюшины вскрывают ножницами. При наличии экссудата в брюшной полости делают из него мазок и производят посев в пита­тельную среду. Затем осматривают печень, селезенку, почки, отмечая цвет, величину органов, характеризуя их консистен­цию (нормальная, дряблая, уплотненная, хрупкая) и имею­щиеся очаги поражения, например абсцессы.

При локализации инфекционного процесса в желудочно-кишечном тракте делают посев содержимого желудка и кишечника, набирая его в пастеровскую пипетку через приж­женную желудочную и кишечную стенки. Таким же образом для посева берут экссудат, содержимое абсцессов, желчного и мочевого пузыря.

Из паренхиматозных органов (печень, почки, селезенка) взятие материала и засев его производят одним из следующих способов.

· У стерильной пастеровской пипетки обламывают кон­чик и проводят ее через пламя горелки. Затем капилляром пипетки прокалывают прижженный участок исследуемого ор­гана и насасывают в нее тканевую жидкость, которую засе­вают в питательную среду. Пипетки после использования опу­скают в банку с дезинфицирующим раствором.

· Прижженную поверхность органа надрезают стериль­ным скальпелем и из глубины надреза соскабливают бакте­риальной петлей небольшое количество материала, которое затем вносят в питательную среду.

· На прижженной поверхности органа делают надрез, остроконечными ножницами из глубины его вырезают ма­ленький кусочек, раздавливают между браншами пинцета и опускают в жидкую питательную среду или срезом ку­сочка делают отпечатки на поверхности плотной питательной среды.

Изменения, обнаруженные при вскрытии трупа, а также результаты бактериологического исследования вносят в про­токол вскрытия и бактериологического исследования трупного материала, составленный примерно по такому образцу:

1. Вид лабораторного животного, взятого в опыт.

2. Время заражения (месяц, число, час).

3. Материал, примененный для заражения (взвесь микро­бов с плотной питательной среды, бульонная культура, взвесь патологического материала и т. д.).

4. Время гибели животного (месяц, число, час).

5. Изменения, обнаруженные при вскрытии животного в месте введения заразного материала, состояние подкожной клетчатки, лимфатических узлов; изменения, найденные во внутренних органах.

6. Вид микроба, выделенного из трупного материала, его основные морфологические, культуральные, биохимические и серологические свойства.

После вскрытия трупы животных складывают в металличе­ские бачки с плотно закрывающимися крышками и засыпа­ют сухой хлорной известью. Трупы мелких лабораторных животных можно заливать раствором различных дезинфициру­ющих веществ: 5% раствором карболовой кислоты, 3—5% мыльно-карболовым раствором, 3—5% раствором хлорамина. Трупы животных, погибших от заражения споровыми форма­ми микробов, заливают хлорно-известковым молоком или 5—10% осветленным раствором хлорной извести. В дезинфици­рующем веществе трупы животных хранят до момента их сжигания.

 
Таблица 1. Журнал регистрации поступления и распределения лабораторных животных в экспериментально-биологической клинике (виварии)
Дата поступления Вид животных Пол Масса тела, возраст Постав- щик Распределение (No клетки) Наблюдение во время карантина Дата окончания карантина Кому выданы животные
                 

 

Загрузка...

© 2013 wikipage.com.ua - Дякуємо за посилання на wikipage.com.ua | Контакти